仅此一夜主人公马六本有一个幸福的家庭，可一次心血来潮的亲子鉴定，让马六偶然得知寄予厚望的儿子可能并非“自己亲生”，悲愤之下与妻子牛芸展开一番斗智斗勇的“暗战”。可不料事情频出反转，究竟马六的孩子不是亲生的， 还是马六本人不是亲生的，抑或另有隐情？祖孙三代原本平静的生活因此掀起风浪。两个家庭鸡飞狗跳，马六的费心经营却适得其反，闹出不少笑话。